木聚糖酶能將木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下可以與３,５-二硝基水楊酸(DNS)試劑發(fā)生顯色反應(yīng)。反應(yīng)液顏色的深度與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，而還原糖的生成量又與反應(yīng)液中木聚糖酶的活力成正比。因此，通過測定反應(yīng)液顏色的強(qiáng)度，可以計(jì)算反應(yīng)液中木聚糖酶的活力。
價(jià)格：￥20.00
規(guī)格：反應(yīng)
貨號：ST1470
品牌：LEAGENE
服務(wù)介紹：
木聚糖酶能將木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下可以與３,５-二硝基水楊酸(DNS)試劑發(fā)生顯色反應(yīng)。反應(yīng)液顏色的深度與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，而還原糖的生成量又與反應(yīng)液中木聚糖酶的活力成正比。因此，通過測定反應(yīng)液顏色的強(qiáng)度，可以計(jì)算反應(yīng)液中木聚糖酶的活力。
貨號 | 名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
ST1470 | 木聚糖酶檢測試劑 | 反應(yīng) | 20元 |
實(shí)驗(yàn)流程：
1、準(zhǔn)備樣品:
①固體樣品稱取試樣兩份，精確至0.001 g。 加入4ml Assay buffer，充分溶解，并定容至10 ml，在4 °C條件下避光保存1~2h。1000g離心3~5min，取上清液，再用Assay buffer做適當(dāng)稀釋、定容(稀釋后的酶液中木聚糖酶活力最好能控制在0.04~0.10U/ml之間）。
②液體樣品可以直接用Assay buffer稀釋、定容(稀釋后的酶液中木聚糖酶活力最好能控制在 0.04~0.10 U/ml之間）
2、配制木聚糖溶液：準(zhǔn)確稱取0.15g 木聚糖，使充分溶解于8ml去離子和5ml NH水溶液(3×)中，通過pH計(jì)測定，用YS溶液調(diào)節(jié)pH至5.5~5.6，補(bǔ)水至15ml
2、配制NH水溶液(1×)：取1份NH水溶液(3×)和2份去離子水混合即成。
3、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：取8支離心管按下表設(shè)置，準(zhǔn)確吸取木糖標(biāo)準(zhǔn)(10mg/ml)與Assay buffer，即得不同濃度的木糖梯度標(biāo)準(zhǔn)。
加入物(ml) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
木糖標(biāo)準(zhǔn)(10mg/ml) | 0.01 | 0.02 | 0.03 | 0.04 | 0.05 | 0.06 | 0.07 |
Assay buffer | 0.99 | 0.98 | 0.97 | 0.96 | 0.95 | 0.94 | 0.93 |
木糖標(biāo)準(zhǔn)(mg/ml) | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.4 | 0.5 | 0.6 | 0.7 |
取1支離心管，加入0.08mlAssay buffer和0.1mlDNS試劑，混勻，沸水浴加熱5min，自來水冷卻至室溫，加NH水溶液(1×)0.32ml，即為空白管。另取7支離心管，加入0.04ml 37℃預(yù)熱的Assay buffer、0.04ml木糖梯度標(biāo)準(zhǔn)和0.1mlDNS試劑，混勻，沸水浴加熱5min，自來水冷卻至室溫，加NH水溶液(1×)0.32ml，即為標(biāo)準(zhǔn)管。以空白管調(diào)零，酶標(biāo)儀測定540nm處各管的吸光度。
測定樣品
①取適量的木聚糖溶液和酶提取液置于不同的離心管中，37°C 平衡 20 min；木聚糖溶液使用之前應(yīng)充分搖勻。
②取2支離心管按下表設(shè)置依次加入相應(yīng)試劑：
加入物(ml) | 對照管 | 測定管 |
酶提取液 | 0.04 | 0.04 |
Assay buffer | 0.04 | - |
木聚糖溶液 | - | 0.04 |
37℃水浴30min | ||
DNS試劑 | 0.1 | 0.1 |
立即搖勻，放入沸水浴中顯色5min， 立即取出，流水冷卻至室溫，加 NH水溶液(1×)0.32ml | ||
以空白管調(diào)零，酶標(biāo)儀測定540nm處對照管和測定管的吸光度(分別記為A1、A0)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
全自動生化儀檢測后導(dǎo)出結(jié)果，結(jié)果由EXCEL形式發(fā)送。
送樣運(yùn)輸要求：
1、動植物組織樣本(干冰運(yùn)輸)
準(zhǔn)確稱取動物組織重量按重量(mg)：體積(ul)=1:9的比例加入9倍體積的勻漿介質(zhì)(推薦0.86%或0.9%的生理鹽水)，冰水浴條件下，機(jī)械勻漿，制備成10%的勻漿液，2500~3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心10分鐘，取上清液進(jìn)行測定。
2、血清樣本(干冰運(yùn)輸)
全血標(biāo)本請于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜（GLU檢測請勿全血樣本放置過夜取血清）后于2-8℃ 3000轉(zhuǎn)/分離心15min，取上清即可立即檢測;或進(jìn)行分裝，并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣本應(yīng)再次離心，然后檢測。
3、血漿樣本(干冰運(yùn)輸)
可用肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃3000轉(zhuǎn)/分離心15min，取上清即可立即檢測;或進(jìn)行分裝，并將標(biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。解凍后的樣本應(yīng)再次離心，然后檢測。
4、細(xì)胞樣本
貼壁細(xì)胞：將細(xì)胞用PBS沖洗2次后，用細(xì)胞刮將細(xì)胞小心刮下來，將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分，離心10min。棄上清留細(xì)胞沉淀，干冰運(yùn)輸。
懸浮細(xì)胞：將培養(yǎng)液3000轉(zhuǎn)/分，離心10min。棄上清留細(xì)胞沉淀，干冰運(yùn)輸。
細(xì)胞上清：標(biāo)本于2-8℃，3000轉(zhuǎn)/分離心15min取上清，上清立即用于實(shí)驗(yàn)，或分裝后于-20℃或-80℃保存。避免反復(fù)凍融。
僅供科研用途，不可用于臨床診斷！
